11656 – GLUCOSA HK

HEXOQUINASA

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FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La glucosa presente en la muestra genera, según las reacciones acopladas descritas a continuación, NADPH que se cuantifica espectrofotométricamente.

HK

Glucosa + ATP ————————–> Glucosa-6-fosfato + NADP+

G6P-DH

Glucosa-6-fosfato + ADP ———————> Gluconato-6-fosfato + NADPH + H+

COMPOSICIÓN

• A. Reactivo 1 x 160 mL: Tampón 70 mmol/L, Hexoquinasa >15 U/mL, NADP >1.5 mM,

  conservantes, pH 6,9.

• B. Reactivo 1 x 40 mL: Tampón 150 mmol/L, ATP >15 mmol/L, glucosa-6-fosfato

  deshidrogenasa >10 U/mL, conservantes, pH 8,9.

• S. Patrón de Glucosa/Urea/Creatinina. 1 x 5 mL. Glucosa 100 mg/dL (5,55 mmol/L), urea 50 mg/dL (8,3 mmol/L), creatinina 2 mg/dL (177 μmol/L). Patrón primario acuoso.

CONSERVACIÓN

Conservar a 2-8oC.

Los Reactivos y el Patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso.

Indicaciones de deterioro:

• Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior a 0,300 a 340 nm (cubeta de 1 cm).
• Patrón: Presencia de partículas o turbidez.

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

Patrón (S): Está listo para su uso.

Reactivo de Trabajo. Vaciar el contenido del Reactivo B en el frasco del Reactivo A. Agitar suavemente. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de Reactivo A + 1 mL de Reactivo B. Estable 3 meses a 2-8oC.

EQUIPO ADICIONAL

– Baño de agua a 37oC

– Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 340 ± 20 nm

MUESTRAS

Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. El suero o plasma deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adición de fluoruro sódico a la muestra de sangre previene la glucolisis. La glucosa en suero o plasma es estable 5 días a 2-8oC. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren.

Orina espontánea fresca: Una vez recogida realizar el análisis inmediatamente; en caso de no poder efectuar el análisis inmediatamente guardar las muestras a 2-8oC. Orina de 24 horas:

Una vez recogida mezclar con 10 mL de ácido clorhídrico al 10% (v/v), guardar a 2-8oC, y realizar la medición lo antes posible.

Líquido cefalorraquídeo recogido por procedimientos estándard. El líquido cefalorraquídeo puede estar contaminado por bacterias u otras células y por lo tanto, la glucosa debe ser analizada inmediatamente.

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